硫酸銨沉淀的方法是什么?

對于常規(guī)可再生的純化過程,可以避免使用硫酸銨沉淀以利于層析.

通常沉淀對于濃度低于1mg/ml的蛋白幾乎無效.

沉淀所需溶液：

飽和硫酸銨溶液(在100ml蒸餾水中加入100g硫酸銨,攪拌溶解).

1M Tris-HCl,pH 8.0

用于第一步純化的緩沖液.

方法：

1,過濾(0.45μm膜)或離心樣品(4°C 10000g).

2,每10倍體積的樣品中加入一倍的1M Tris-HCl,pH 8.0以維持pH值.

3,溫和攪拌.逐滴加入硫酸銨溶液,最高至50%飽和度.攪拌1小時.

4,10000g離心20min.

5,去除上清,用等體積相同濃度的硫酸銨溶液(如不能溶解沉淀也不會造成進一步沉淀的溶液)洗滌重懸沉淀兩次.再次離心.

6,使用少量體積后面步驟所需的溶液溶解沉淀.

7,硫酸銨在凈化/更換緩沖液步驟中使用脫鹽柱除去.

硫酸銨沉淀法的基本原理是什么?

這是一種從大量粗制品中提取并部分提純蛋白質(zhì)的方法。主要是通過將免疫球蛋白從試樣中分離，通常采用的方法是：高濃度的鹽離子蛋白溶液和蛋白質(zhì)的水分子發(fā)生競爭，導致其水和蛋白質(zhì)分子減弱，通過溶解度從溶液沉淀出來。因不同的蛋白質(zhì)溶解度相同，所以用相同的鹽溶液進行沉淀，稱為鹽析。鹽的含量一般用飽和度來表示，而硫酸銨由于具有較高的溶解度，較低的溫度系數(shù)，容易引起蛋白的變性，因此得到廣泛的應用。